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你了解Biolegend流式細(xì)胞的分選原理嗎？

發(fā)布時間： 2019-10-15　　點擊次數(shù)： 1652次

　　Biolegend流式細(xì)胞分選的原理：
　　當(dāng)經(jīng)熒光染色或標(biāo)記的單細(xì)胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動室內(nèi)。流動室內(nèi)充滿鞘液，在鞘液的包裹和推動下，細(xì)胞被排成單列，以一定速度從流動室噴口噴出。在流動室的噴口上配有一個超高頻的壓電晶體，充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測細(xì)胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負(fù)不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)過帶有幾千伏的偏轉(zhuǎn)板時，在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn)，落入各自的收集容器中，沒有充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實現(xiàn)細(xì)胞的分離。
　　Biolegend流式細(xì)胞分選，它可根據(jù)發(fā)射光的熒光強度和波長將發(fā)光顆粒亞群分開并可實現(xiàn)單克隆分選，能復(fù)雜樣本中的細(xì)胞進(jìn)行鑒定、分類、定量和分離，單次可同時對其中一種到四種特定細(xì)胞進(jìn)行超高速分選純化、高通量單克隆分選或細(xì)胞芯片制備。分選后的細(xì)胞能直接用于培養(yǎng)、移植、核酸提取、單細(xì)胞PCR擴增或原位雜交等，可進(jìn)一步進(jìn)行細(xì)胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同細(xì)胞之間的差異化研究。硬件中樣本細(xì)胞丟棄的比例低于5%，保證樣本中目標(biāo)細(xì)胞的高回收率。

　　Biolegend流式細(xì)胞的特點：
　　1、少量細(xì)胞分選時，流式細(xì)胞分選度高（99%以上），速度快。的流式細(xì)胞儀的分選速度可達(dá)25000個細(xì)胞/秒以上，比傳統(tǒng)的分選速度提高了很多倍，需要的工作只需要幾小時就能完成。不過流式細(xì)胞儀分離細(xì)胞的量還是有一定的限制，一次分離的大合理量約為108個細(xì)胞。如果細(xì)胞量超過109個，則需要耗費10小時以上，分選后細(xì)胞的活力會受到很大的影響。
　　2、可以同時進(jìn)行多個Marker分選，正選負(fù)選同時進(jìn)行。以前的流式細(xì)胞儀只能給液滴充上正電荷或負(fù)電荷，因此在電場中只能向左或向右偏轉(zhuǎn)，即兩路分選。儀器可以給液滴充以不同的電量，從而調(diào)整液滴的偏轉(zhuǎn)角度，實現(xiàn)多路分選。BD的FACSAria流式細(xì)胞儀就可以進(jìn)行四路分選。
　　3、不僅于表面抗原，流式細(xì)胞儀可以根據(jù)任何能檢測到的發(fā)光度或熒光散射度差異來分離細(xì)胞。如果能保證流式細(xì)胞儀的無菌狀態(tài)，那么分選后的細(xì)胞還可以進(jìn)行培養(yǎng)或其他分析。
　　4、如果只是偶爾做幾次細(xì)胞分選的話，用流式分選還是比較劃算的，只需要準(zhǔn)備樣品和抗體，交納一定的儀器使用費即可，不需要購買配套的設(shè)備。

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