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利用新型成像細胞儀直接測定干細胞的濃度、活力和表型
摘要：間充質(zhì)干細胞是多能干細胞的一個子集，可以從中胚層中分離出來。它們具有自我復制更新和多向分化的特點，在醫(yī)學上的各種治療中具有很高的潛力。間充質(zhì)干細胞具有特的免疫表型和免疫調(diào)節(jié)能力。因此，間充質(zhì)干細胞已經(jīng)廣泛應用于干細胞移植、組織工程和器移植。除了這些應用之外，它們在一系列基礎和臨床研究實驗中作為種子細胞被用作組織工程的理想工具。到目前為止，還沒有一個廣泛接受的方法和標準來控制間充質(zhì)干細胞的質(zhì)量。Countstar Rigel可以監(jiān)測這些干細胞生產(chǎn)和分化過程中的濃度、活力和表型特征（及其變化）。Countstar Rigel還具有在細胞質(zhì)量監(jiān)測的整個過程中通過久明場和基于熒光的圖像記錄獲得額外形態(tài)信息的優(yōu)勢。Countstar Rigel為干細胞的質(zhì)量控制提供了一種快速、復雜和可靠的方法。
材料和方法：
齊念敏教授用AO/PI染色液（上海瑞宇，CF002）對脂肪源性間充質(zhì)干細胞（AdMSCs）進行了研究。抗體：CD29，CD34，CD45，CD56，CD73，CD105，HLADR（BD公司）。
AdMSCs在37℃、5%CO2濕化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。使用前用胰蛋酶消化。
按照CD標記染色程序作為抗體的手冊。
使用Countstar Rigel檢測CD標記：
1.通過設置PE通道以對PE熒光成像來創(chuàng)建信號顏色應用程序。
2.從每個腔室捕獲3個場。
3.成像和初步分析完成后，通過FCS軟件設置陽性和陰性轉(zhuǎn)染的閾值（對數(shù)門）設置。
干細胞的質(zhì)量控制
下圖（圖1）顯示了干細胞治療的程序。
圖1：干細胞治療程序
結果：
測定AdMSCs的濃度、活力、直徑和聚集性。
通過AO/PI測定AdMSCs的活力。通過設置綠色通道和紅色通道對AO和PI熒光以及亮場進行成像，創(chuàng)建了雙色應用程序。示例圖像如圖2所示。
圖2:AdMSC運輸前和運輸后的圖像。A.運輸前；示出了代表性圖像。B.運輸后；示出了代表性圖像。
與運輸前相比，運輸后AdMSC的生存能力發(fā)生了巨大變化。運輸前的存活率為92%，但運輸后降至71%。結果如圖3所示。
圖3。AdMSC的生存能力結果（運輸前和運輸后）
直徑和聚集度也由計數(shù)星Rigel測定。與運輸前相比，運輸后AdMSC的直徑發(fā)生了顯著變化。運輸前直徑為19µm，但運輸后直徑增加到21µm。運輸前的總和為20%，但運輸后增加到25%。從Countstar Rigel拍攝的圖像來看，AdMSC的表型在運輸后發(fā)生了巨大變化。結果如圖4所示。
圖4：直徑和聚集結果。A： AdMSC的代表性圖像、AdMSC的表型在運輸后發(fā)生了顯著變化。B： 運輸前的聚集率為20%，但運輸后增加到25%。C： 運輸前直徑為19µm，但運輸后直徑增加到21µm。
Countstar Rigel測定AdMSCs的免疫表型
用Countstar Rigel法測定AdMSCs的免疫表型，將AdMSCs分別與不同的抗體（CD29、CD34、CD45、CD56、CD73、CD105、HLA-DR）孵育。通過設置綠色通道對PE熒光和亮場進行成像，創(chuàng)建了信號顏色應用程序。應用亮場圖片參考分割作為掩模來對PE熒光信號進行采樣。CD105的結果如圖所示（圖5）。
圖5:AdMSCs的CD105結果由Countstar Rigel測定。A： FCS express 5 plus軟件對不同樣本中CD105陽性率的定量分析。B： 高質(zhì)量的圖像提供了額外的形態(tài)學信息。C： FCS軟件工具通過每個細胞的縮略圖驗證結果，根據(jù)細胞不同的蛋白質(zhì)表達將細胞分為不同的組。
其他抗體結果如圖6所示
圖6:A：具有典型紡錘形形態(tài)的ASCs的代表性圖像。通過奧林巴斯顯微鏡拍攝。原始放大倍數(shù)，（10倍）。B： 釕紅染色顯示礦化區(qū)域，證明了ASCs的脂肪分化。通過奧林巴斯顯微鏡拍攝。原始放大倍數(shù)（10倍）。C： ASCs的Countstar FL特征。
摘要：
Countstar FL可以監(jiān)測這些干細胞生產(chǎn)和分化過程中的濃度、活力和表型特征（及其變化）。FCS express提供了審查每個信號單元、通過圖像驗證數(shù)據(jù)的功能。用戶也可以有信心根據(jù)Countstar Rigel的結果進行下一個實驗。Countstar Rigel為干細胞的質(zhì)量控制提供了一種快速、復雜和可靠的方法。
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